Hình ảnh tế bào sống đòi hỏi kính hiển viĐiều đó giảm thiểu độc tính photot, duy trì khả năng tồn tại của tế bào và cung cấp hình ảnh độ phân giải cao theo thời gian. Các lựa chọn phổ biến bao gồm:
1. Kính hiển vi huỳnh quang đảo ngược:
Kính hiển vi rộng rãi: Được trang bị các điều khiển môi trường (nhiệt độ, Co₂, độ ẩm) và máy ảnh nhạy cảm (ví dụ: SCMOS). Thường được kết hợp với tương phản pha hoặc DIC (độ tương phản nhiễu vi sai) cho hình ảnh không có nhãn.
Xu hướng đĩa quay: Giảm photebleaching khi quét nhanh hơn so với đồng tiêu quét laser truyền thống. Lý tưởng cho các quá trình động.
2. Kính hiển vi huỳnh quang tấm ánh sáng (LSFM):
Chỉ chiếu sáng mặt phẳng tiêu cự, giảm đáng kể phơi sáng ánh sáng và cho phép hình ảnh dài hạn (ví dụ: giờ đến ngày).
3. Kính hiển vi hai photon:
Sử dụng ánh sáng gần hồng ngoại để thâm nhập mô sâu hơn và giảm độc tính quang, phù hợp cho các mẫu dày như nuôi cấy 3D.
4. TIRF (Tổng huỳnh quang phản xạ bên trong):
Hình dung các sự kiện tạimàng tế bào(ví dụ: buôn bán túi) bằng cách chụp ảnh một phần quang học mỏng (~ 100nm).
5. Kính hiển vi siêu phân giải (ví dụ: STED, SIM):
Đạt được độ phân giải cao hơn nhưng yêu cầu tối ưu hóa cẩn thận để cân bằng phơi nhiễm ánh sáng và sức khỏe tế bào.
6. Hệ thống được tối ưu hóa tế bào trực tiếp:
Kết hợp các buồng môi trường, quang học thích ứng và máy dò ánh sáng yếu (ví dụ: máy ảnh EM-CCD).
Các tính năng chính cho hình ảnh trực tiếp:
- Kiểm soát môi trường: Duy trì nhiệt độ, Co₂ và độ ẩm.
- Thu thập nhanh: Giảm thiểu mờ chuyển động cho các quy trình động.
- Độc tính quang thấp: Bộ lọc, nguồn sáng LED hoặc chiếu sáng tấm ánh sáng làm giảm thiệt hại.
Chọn dựa trên nhu cầu độ phân giải, thời lượng hình ảnh và độ nhạy mẫu.
